PEMBUATAN MEDIA KULTUR JARINGAN

A.  Komponen Media

Komposisi media kultur jaringan terdiri dari sejumlah unsur yang diperlukan untuk pertumbuhan eksplan dalam lingkungan buatan, unsur-unsur ini umumnya terdapat di tanah.  Komponen kultur jaringan dapat dikelompokkan ke dalam :

1.      Unsur makro : nitrogen (N), fosfor (P), kalium (K), kalsium (Ca), magnesium (Mg) dan Sulfur (S)

2.      Unsur mikro : boron (B), cobalt (Co), tembaga (Cu), iodium (I), besi (Fe), mangan (Mn), molybdenum (Mo) dan seng (Zn)

3.      Vitamin (vitamin B1) dan Myo-inositol, pada beberapa formula media ditambahkan niasin dan piridoksin (B6)

4.      Gula (sukrosa) sebagai sumber energy

5.      Zat pengatur tumbuh, untuk merangsang dan mengontrol pertumbuhan

6.      Arang aktif, sebagai penyerap racun (jika diperlukan)

7.      Air (aquadest) sebagai pelarut

8.      Agar-agar

B.  Formulasi Media

Terdapat banyak formula/resep media tanam kultur jaringan yang pada umumnya diberi nama sesuai dengan nama penemunya, antara lain :

1.      Murashige dan Skoog (MS), memiliki kisaran yang luas

2.      Gamborg atau B-5

3.      Vacin Went (VW)

4.      Nitsch dan Nitsch

5.      Schenk dan Hildebrandt (SH)

6.      Woody Plant Medium (WPM)

PERHITUNGAN KEBUTUHAN MEDIA

A.  Dasar Perhitungan Kebutuhan Media

      Kebutuhan media dan larutan stok ditentukan oleh sejumlah factor :

1.      Jumlah dan jenis bibit yang akan diproduksi

2.      Jenis media yang dipilih

3.      Metode kultur jaringan yang dipilih

4.      Frekuensi penggandaan propagul (kumpulan kalus)

5.      Cara pengakaran kultur

Sebagai contoh, kita akan menghitung kebutuhan media dan larutan stok untuk satu kegiatan, yaitu inisiasi kultur sebagai berikut.  Bila kita menginisiasi biji anggrek, secara berkala (per minggu) dengan target 40 botol yang menggunakan media per botolnya 25 ml, maka kebutuhan media per minggu 1 liter.  Kita membutuhkan 10 liter untuk 2,5 bulan.  Oleh karrena itu kita dapat m embuat larutan stok 10 kali konsentrasi media untuk membuat 10 liter media agar masa simpannya tidak terlalu lama.

B.  Cara Perhitungan Kebutuhan Media dan Larutan Stok

            Cara perhitungan kebutuhan media dan larutan stok disajikan dibawah ini dan hasilnya secara lengkap dapat dilihat pada Tabel 2 .  Tabel 2 menyajikan macam-macam larutan stok yang  sebaiknya ada pada pembuatan media MS, pengelompokkan bahan-bahan penyusun larutan stok, perhitungan kebutuhan bahan-bahan untuk pembuatan larutan stok per 10 liter media, ukuran volume wadah untuk tempat larutan stok, perhitungan konsentrasi masing-masing stok dan banyaknya pengambilan (volume) larutan stok yang diambil untuk keperluan pembuatan media 1 liter.

Tabel 2.  Kebutuhan Bahan Larutan Stok Media MS

Kode stok	Nama Stok	Bahan yang ditimbang (mg)	Volume wadah stok (ml)	Stok yang diambil untuk 1 liter media (ml)
Stok Makro		10 x
A	KNO3	19000	100	10
B	NH4NO3	16500	100	10
C	CaCl2.2H2O	4400	100	10
D	MgSO4.7H2O	3700	100	10
E	KH2PO4	1700	100	10
Stok Mikro 1		100 x
F	H3BO3	62	100	1
	Na2MoO4.7H2O	2,5
	CoCl2.6H2O	0,25
	KI	8,3
	MnSO4	169
	ZnSO4.7H2O	86
	CuSO4.5H2O	0,25
Stok Mikro 2		10 x
G	FeSO4.7H2O	278	100	10
	Na2EDTA	373
Stok Vitamin		10 x
H	Glisin	20	100	10
	Asam nikotin	5
	Piridoksin HCl	5
	Thiamin HCl	1
Stok Hormon (sesuai Kebutuhan)
I	BAP	100	100	1
	NAA	100	100	1

Perhitungan kebutuhan media dan larutan stok untuk melengkapi table diatas adalah sebagai berikut :

1.      Kebutuhan bahan-bahan untuk 10 liter media MS makro (kolom 2) = 10 x bobot bahan-bahan media MS (mg/l) pada Tabel 1.  Contoh KNO₃ = 1900 mg x 10  = 19000 mg

2.      Volume pengambilan stok untuk setiap pembuatan media 1 liter menggunakan rumus :

V1 x M1  =  V2 x M2

Dimana:           V1  =  Volume stok yang dicari

                        M1  =  Konsentrasi larutan stok

                        V2  =  Volume larutan stok

                        M2  =  Konsentrasi yang diinginkan

Contoh : banyaknya (volume) stok KNO₃ yang diambil untuk membuat 1 liter media sebagai berikut :

V1 x M1  = V2 x M2

V1 x 19000  =  100 x 1900

V1 =  190000/ 19000 = 10 ml